产品货号：
GS2214
中文名称：
T4 DNA连接酶
英文名称：
T4 DNA Ligase
产品规格：
200U|1000U|2500U
发货周期：
1～3天
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T4 DNA Ligase催化双链DNA或RNA中毗邻的5'磷酸基团和3'羟基末端之间形成磷酸二酯键。酶还可以修复双链DNA，RNA或DNA/RNA复合体中的单链切口，连接DNA的粘性和平末端，但是该酶对单链核酸无酶活性。T4 DNA Ligase需要辅因子ATP。
◆ 粘性末端或平末端双链DNA的连接。
◆ 双链寡核苷酸接头与双链DNA连接。
◆ 双链DNA、RNA或DNA-RNA复合体中缺口的修复。
◆ 连接酶介导的RNA检测。
◆ 位点特异性突变。
◆ 扩增片段长度多态性。
含有T4噬菌体克隆基因30的大肠杆菌。
| 组分 | 200U | 1000U | 2500U |
| T4 DNA Ligase(5U/μL) | 40μL | 200μL | 500μL |
| 10×T4 DNA Ligase Buffer | 1mL | 1mL | 3×1mL |
| 50% PEG 4000 | 1mL | 1mL | 3×1mL |
保存：-20℃
20mM Tris-HCl(pH7.5)，50mM KCl，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%甘油。
10×T4 DNA Ligase Buffer：
400mM Tris-HCl(pH7.8@25℃)，100mM MgCl2，100mM DTT，5mM ATP。
当反应体系中NaCl或KCl的浓度超过200mM时，可强烈抑制T4 DNA Ligase活性。
65℃加热10分钟或者70℃加热5分钟。
- DNA插入片段与载体DNA连接
- 制备以下反应体系：
组分 粘性末端 平末端 线性载体DNA 20～100ng 插入片段DNA 与载体的摩尔比为1～5∶1 10×T4 Ligase Buffer 2μL 50% PEG 4000 / 2μL T4 DNA Ligase 1μL(5U) 2μL(10U) ddH2O 至20μL - 粘性末端：22℃孵育大于10分钟；平末端：22℃孵育大于1小时。
- 65℃热失活10分钟。
- 转化：每50μL化学感受态细胞使用5μL连接产物；每50μL电转化感受态细胞使用1～2μL连接产物。
- 如有必要增加转化子数量。
- 如果连接产物的产量不够，建议4℃孵育连接过夜。
- 采用氯仿抽提替换热失活方法，平末端连接产物建议采用电转化方法。
- 制备以下反应体系：
- 线性DNA自身环化
- 制备以下反应体系：
成分 用量 线性载体DNA 10～50ng 10×T4 Ligase Buffer 5μL T4 DNA Ligase 1μL(5U) ddH2O 至50μL - 充分混匀后短暂离心，22℃孵育大于1小时。
- 65℃热失活10分钟。
- 取大约5μL连接产物转化50μL化学感受态细胞。
- 采用氯仿抽提替换热失活方法，平末端连接产物建议采用电化学方法。
- 制备以下反应体系：
- 接头连接
双链寡核苷酸接头常用于产生插入片段中没有的兼容性突出末端。接头含有限制酶识别位点，与目标片段连接后酶切可产生与克隆载体匹配的粘性末端。此外接头也可直接带有匹配的粘性末端，与克隆载体直接连接，无需格外操作。- 制备以下反应体系：
成分 连接，用于后续酶切 仅仅连接 线性DNA 5μL(100～500ng) 磷酸化接头 5μL(1～2μg) 10×T4 Ligase Buffer — 2μL 限制性酶切反应Buffer 2μL — ATP,10mM 1μL — T4 DNA Ligase 0.4μL(2U) ddH2O 至20μL - 充分混匀后短暂离心，22℃孵育大于1小时。
- 65℃热失活10分钟。
- 连接产物酶切前无需纯化，可将限制酶直接加入连接反应混合物中。
- 制备以下反应体系：
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